如何判定PCR儀的好賴?
(一)、溫度準確性
溫度準確性是PCR儀重要的性能指標,如溫度準確性低可直接造成非特異性擴增,甚至是錯誤的擴增結(jié)果,造成假陽性和假陰性。
市場上各家廠商考核基因擴增儀(PCR儀)性能的主要指標,一般廠家的企業(yè)指標為±0.5℃,一些性能較好的產(chǎn)品可以實現(xiàn)的溫度準確度為±0.3℃。故需對PCR儀控溫準確度進行測試。校準實驗平均溫度的計算公式為:I—參加檢測的溫度探頭序號;n—參加檢測的溫度探頭的數(shù)量
(二)、溫場均勻性
由于PCR儀加熱器加熱不均勻,導致PCR儀模塊上各孔存在一定溫差。造成試驗結(jié)果偏差。一般PCR儀邊緣點的溫度低于中間區(qū)域,所以均勻性為PCR儀重要的性能指標。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定均勻性為±0.5℃,一些性能較好的產(chǎn)品可以實現(xiàn)的溫度均勻度為±0.3℃。校準實驗時,通過選取孔板中16個特殊反應(yīng)位置來測量溫度,并得出孔板的溫度均勻性。均勻性為各個探頭在同一時刻max溫度與min 溫度的差值。均勻度計算公式為:tmax-tmin
(三)、升降溫速率
PCR擴增產(chǎn)物數(shù)量的決定了PCR的效率。為了在短時間內(nèi)獲得盡可能多的產(chǎn)物,需要儀器在升降溫段具有按照預(yù)設(shè)升降溫速率快速升溫和降溫的能力(max-升溫速率達15~20℃)。一個完整的PCR過程,是由若干個升溫→恒溫→降溫循環(huán)構(gòu)成的。因為“變性”,“退火”和“延伸”3個階段是必須要***的。因此,只有使升降溫的過程盡可能地迅速,才能縮短每個PCR循環(huán)以及整個PCR 過程所需時間。一般廠家的企業(yè)指標規(guī)定升溫速率為±3℃/sec。
儀器校準實驗時,升溫速率為溫度從40℃到90℃的時間;降溫速率為溫度從70℃到35℃的時間。
(四)、max-調(diào)溫度
當溫度從一高溫度調(diào)節(jié)到另一低溫度,就會產(chǎn)生溫度的調(diào)。調(diào)溫度過大同樣會對試驗產(chǎn)生影響,所以校準實驗時,需要計算max-調(diào)溫度和平均調(diào)溫度。
PCR儀溫度驗證系統(tǒng) PCR儀溫度系統(tǒng)
性能特點:
96孔探頭配置:96孔測溫探頭板配置15個溫度探頭,支持熱蓋測溫,適用96孔PCR設(shè)備,探頭板厚度不2mm;
44孔探頭配置:采用組合式測溫探頭,3組16孔溫度探頭板,每個探頭板6個測溫探頭,可自由組合,探頭板厚度不2mm,且都支持熱蓋測溫,適用44孔PCR設(shè)備,可適配博日QuantGene系列、宏石Slan96/48、可適配安譽4800/9600等型號PCR儀;
1/2/3/4/6/7/8孔探頭配置:4個單個無線測溫探頭;
測溫范圍:0-120℃,溫度的分辨率0.01℃,精度優(yōu)于±0.1℃;
96孔探頭同時支持無線和有線數(shù)據(jù)實時傳輸。無線模式下 ,采用ZigBee無線通訊,傳輸距離不少于30米;有線模式下,數(shù)據(jù)線可插拔,同時支持下側(cè)和右側(cè)出線;
組合式測溫探頭的單個測溫板可獨立無線實時數(shù)據(jù)傳輸,可通過ZigBee通訊無線組網(wǎng),且支持多個測溫板組合同時對同一臺或幾臺被測儀器測試;
單個無線測溫探頭可獨立無線實時數(shù)據(jù)傳輸,可通過ZigBee通訊無線組網(wǎng),長寬不過18*15mm,以滿足國內(nèi)外不同型號熒光PCR設(shè)備內(nèi)部空間的限制性要求,可適配安譽DA7600、AGS8830-8等設(shè)備。
所有探頭內(nèi)置電池,不需要插電工作,連續(xù)工作時長不低于200小時;
數(shù)據(jù)收集速度支持每秒1-5次可調(diào),以準確反應(yīng)PCR反應(yīng)升降溫速度;
支持離線數(shù)據(jù)收集和數(shù)據(jù)導出,存儲量不少于30000組;
支持實時查看無線設(shè)備的信號強度和電池電量信息;
支持采集到的所有原始溫度數(shù)據(jù)導出為Excel格式文件,以便對測試結(jié)果進一步分析;
支持中文操作界面,支持2D/3D溫場熱成像圖實時播放及回放;
能自動輸出包含不確定度,至大至小過沖等參數(shù),且符合JJF 1527-2015的校準報告;
PCR儀溫度驗證系統(tǒng) PCR儀溫度系統(tǒng)

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